ELISpot檢測最初于1980年代初開發(fā)并報道，用于計數(shù)分泌特異性抗體的B細胞，隨后，該技術(shù)被調(diào)整并應(yīng)用于定量人或小鼠樣本中產(chǎn)生特定細胞因子的免疫細胞。自此，ELISpot技術(shù)開始迅速發(fā)展，并與ELISpot圖像分析相結(jié)合，目前已廣泛用于免疫學研究和臨床應(yīng)用，可用于測量多種類型免疫細胞對微生物病原體、疫苗以及外來或自身抗原的抗原誘導(dǎo)或自發(fā)性特定細胞因子反應(yīng)。它的檢測原理為：炎癥細胞分泌的細胞因子被膜上的捕獲抗體捕獲，并通過二級檢測抗體與在捕獲的細胞因子部位沉淀形成可見斑點的底物結(jié)合進行可視化。與酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）相比，ELISpot測定的優(yōu)勢在于不僅可以測量單細胞水平的細胞因子反應(yīng)，而且對產(chǎn)生特異性細胞因子的細胞具有更高的檢測靈敏度。目前ELISpot已成為主流免疫學檢測技術(shù)之一，在國內(nèi)外免疫學界獲得了高度的認可和廣泛的關(guān)注，那么它有哪些優(yōu)點呢？

技術(shù)優(yōu)勢：

1. 高靈敏度：ELISpot理論上可達到百萬分之一的靈敏度，即一百萬個細胞中只要有一個分泌細胞因子的陽性細胞就能檢測出來。

2. 單細胞水平：檢測的是單個細胞分泌，而非細胞群體的平均分泌，對研究生物體的細胞免疫和細胞功能提供有效的檢測策略。

3. 功能性檢測：動態(tài)的免疫檢測，斑點代表分泌細胞在一段時間內(nèi)的分泌動態(tài)，即“Footprint”。斑點的強弱和數(shù)量反映了細胞對刺激物的反應(yīng)能力和分泌細胞因子的動態(tài)能力。

4. 高通量檢測：整個流程基于96孔微孔板，適用于高通量實驗和篩選。

5. 重復(fù)性和檢測性高：凍存的細胞同樣可進行ELISpot檢測。

達優(yōu)ELISpot應(yīng)用領(lǐng)域及案例：

1. 疫苗研發(fā)：用于評估疫苗誘導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)。

案例：2020年CDE發(fā)布的《新型冠狀病毒預(yù)防用mRNA疫苗藥學研究》指導(dǎo)原則中強調(diào)了mRNA疫苗的質(zhì)量研究需要進行體內(nèi)效力試驗，推薦使用ELISpot技術(shù)檢測評價mRNA疫苗的細胞免疫反應(yīng)；2025年發(fā)表文章中也有使用ELISpot技術(shù)檢測評估納米疫苗的免疫反應(yīng)^[1]等；

2. 基因治療：檢測基因治療過程中可能引起的免疫反應(yīng)

案例：Kathryn團隊在AAV基因治療藥物Roctavian?的III期臨床試驗中，通過IFN-γELISpot試驗檢測了16名受試者對AAV5衣殼蛋白的細胞免疫反應(yīng)^[2]；

3. 臨床診斷

案例：Oxford Immunotec公司開發(fā)了全球第一個基于ELISpot原理的T-SPOT.TB結(jié)核病診斷試劑盒，用以定量檢測患者血液或體液標本中結(jié)核效應(yīng)T細胞數(shù)，根據(jù)陽性細胞數(shù)（即顯色的斑點數(shù)）來判斷患者結(jié)核分枝桿菌感染狀態(tài)，輔助臨床診斷和排篩結(jié)核。

4. 器官移植

案例：器官移植之前，應(yīng)用ELISpot對供體與受體做免疫相容性檢測，HLA匹配，則供受體細胞之間相容性好，較少刺激物斑點，提示移植手術(shù)成功率高，反之亦然。在器官移植手術(shù)后，用ELISpot監(jiān)視患者體內(nèi)的免疫排斥反應(yīng)，可以有針對性的用藥，避免盲目的使用免疫抑制劑。

5. 免疫學基礎(chǔ)研究

案例：根據(jù)檢測的細胞因子的不同，ELISpot可以用來區(qū)分被激活的不同的T細胞亞群。例如Th1細胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，而其他一些細胞因子如IL-4，IL-5和IL-13一般是由Th2細胞分泌的。在過敏研究中的一個熱點就是采用ELISpot測定Th2型細胞因子，因為Th2反應(yīng)是過敏的主要反應(yīng)，但通常都是低頻率岀現(xiàn)，需要高度靈敏方法才能被成功檢測到。

那么達優(yōu)可以為大家提供哪些種屬及指標的ELISpot試劑盒呢？

產(chǎn)品列表

達優(yōu)ELISpot產(chǎn)品采用高親和力、高效價抗體對，經(jīng)預(yù)包被PVDF板、低溫冷凍干燥、真空密封包裝等工藝流程制備。成品PVDF板上預(yù)包被的抗體分布均勻、效價穩(wěn)定，實驗檢測時間從3天縮短為2天，大幅度減少無菌操作的實驗步驟，減輕實驗者的勞動強度和減少污染的機會。使得實驗者能夠輕松、高效地完成復(fù)雜的ELISpot檢測實驗。